西农萨能奶山羊TRIB3基因克隆及RNA干扰分析

• 作者: 吕明 李聪 潘坛 罗军
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 西农萨能奶山羊 TRIB3 (tribbles pseudokinase 3 gene) 基因克隆 生物信息学分析 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1392-1400
• 页数: 9页
• 分类号: S813.3|S826.9+4|S827
• 字数: 6250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.08.007

摘要

TRIB3 (tribbles pseudokinase 3)是一类丝氨酸/苏氨酸激酶样蛋白,常作为脂质代谢的负调控因子参与胰岛素信号转导途径,调控机体的脂质代谢.本研究旨在获得西农萨能奶山羊(Capra hircus)TRIB3基因序列并阐明其结构,通过RNAi技术干扰TRIB3基因表达,初步探究其对奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢的影响.以西农萨能奶山羊乳腺组织为实验材料,利用RT-PCR方法对TRIB3基因进行克隆,并进行生物信息学分析,研究结果表明,奶山羊TRIB3基因完整CDS区为1 074 bp (GenBank No.MK158243),编码357个氨基酸;蛋白分子量为39.6 ku,等电点为7.8,为不稳定蛋白;TRIB3存在36个磷酸化位点,无信号肽和跨膜螺旋结构;同源性分析显示,西农萨能奶山羊与绵羊(Ovis aries)、牛(Bos taut)、小鼠(Mus musculus) TRIB3氨基酸序列同源性分别为99％、96％、71％,与绵羊亲缘关系最近.组织表达分析显示,TRIB3基因在奶山羊乳腺组织中显著高表达,其次是脂肪组织.将设计合成的siRNA转染乳腺上皮细胞,结果显示,干扰TRIB3基因表达可显著上调脂质代谢相关基因—过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARG)和二酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase,DGAT1)的mRNA水平.上述结果提示TRIB3可能作为负调节因子参与乳腺上皮细胞的脂质代谢.本研究为后续开展TRIB3调控羊奶乳脂代谢的分子机理提供了基础资料.