西农萨能奶山羊PPARγ基因启动子结构与功能分析

• 作者: 史怀平 张天颖 张雪莹 田慧彬 罗军 赫秋亚 陈筱影
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 西农萨能奶山羊 过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ) 启动子 基因克隆 活性分析
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1203-1212
• 页数: 10页
• 分类号: S827
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.07.012

摘要

过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)是核受体家族成员,作为配体激活型转录因子,在调控脂肪酸代谢和脂滴形成等方面发挥重要作用.为分析PPARγ基因启动子结构及功能,完善奶山羊(Capra hircus)乳脂代谢调控网络,本研究以西农萨能奶山羊全血DNA为模板,通过PCR技术扩增PPARγ基因5'侧翼序列,并克隆得到7个长度不同的缺失片段,分别连接pGL3-basic载体构建重组体,利用双荧光素酶报告系统检测各重组质粒活性,结合生物信息学分析确定其转录核心区域;并通过启动子定点突变和过表达CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein alpha,C/EBPα)研究转录因子C/EBPα对PPARγ基因的转录调控.结果表明,克隆得到的PPARγ基因启动子序列全长为2 328 bp(包含转录起始位点上游2 181 bp,GenBank登录号:MG770492.1),启动子上无典型的真核生物元件TATA框,但存在C/EBPα、肝X受体(liver X receptor,LXR)、胆固醇调节元件结合蛋白(sterol-regulatory element binding protein,SREBP)及特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)等多个转录因子结合位点;缺失片段分析结果表明,PPARγ基因启动子核心区域位于转录起始位点上游194～108 bp,且启动子上存在负调控元件;转录因子C/EBPα通过结合位于启动子上游119 bp处的C/EBPα结合元件而调控PPARγ基因的转录.本研究为后续开展PPARγ调控羊奶脂肪酸代谢的机理研究提供了资料.