西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子的克隆及活性测定

• 作者: 张晓 李建华 王伟 罗军 赵旺生
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 西农萨能奶山羊 FAS启动子 基因克隆 活性测定
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 640-647
• 页数: 8页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.03.027

摘要

[目的]克隆测定西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因(fatty acid synthase,FAS)启动子的全长序列,进行活性区域分析,为奶山羊FAS基因功能和表达调控机理研究提供依据.[方法]根据牛和人脂肪酸合酶基因启动子的同源序列以及西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因5UTR区域,分别设计上、下游引物,以西农萨能奶山羊全血DNA为模板克隆启动子序列.依据生物信息学分析结果重设引物,将FAS启动子基因分段克隆并连接到荧光素酶表达载体PGL-3,与Psv-β-半乳糖苷酶对照载体共转染293、MCF-7细胞,进行荧光素酶活性检测和β-半乳糖苷酶的活性检测.[结果]FAS基因启动子序列全长2 640 bp,与牛、人FAS启动子序列同源性90%以上,包括数个潜在SP1、Ets、LSF等转录因子结合位点和CCAAT框、GC框.-1 040-340 bp处可能包含启动子活性中心,通过启动子缺失片段试验将活性中心范围缩小至-721-540 bp之间.[结论]通过克隆FAS基因启动子区域,分析表明启动子前端存在负调控元件,找出了启动子最小活性中心.