microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响

• 作者: 刘戟 吴文兵 彭恒 杨晓龙 胡开锋 董婧颖 赵亚楠 陈丹 陈利弘
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 肺癌A549细胞株 microRNA 甲基化 增殖 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 182-187
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs (miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a)表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响.方法 不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率.20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化.20μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力(计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率);作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力.结果 CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加.经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高(P＜0.05).由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低(P＜0.05),并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少(P＜0.05).结论 人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力.