H3 N2亚型犬流感病毒鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的制备与活性分析

• 作者: 刘永杰 赵丹 邱冬 韩德敏
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: H3N2亚型 犬流感病毒 单链抗体 嵌合抗体 犬源化
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 474-481
• 页数: 8页
• 分类号: S855.3
• 字数: 6808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201810024

摘要

[目的]为减少鼠源单克隆抗体的异源性在犬临床治疗中引起的宿主免疫排斥反应,针对H3 N2亚型犬流感病毒(CIV),制备具有犬源抗体恒定区基因(Fc)的鼠/犬嵌合抗体.[方法]从产生具有良好中和活性CIV单抗的鼠源杂交瘤细胞株中扩增抗体重链和轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得单链抗体基因(scFv)片段,同时从犬外周血单核细胞中扩增得到犬源抗体Fc片段;分别构建单链抗体与嵌合抗体表达载体,通过大肠杆菌表达、纯化后调整蛋白浓度为1 mg·mL-1,检测单链抗体与嵌合抗体的ELISA和血凝抑制(HI)效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性.[结果]获得的H3N2亚型CIV鼠源scFv的相对分子质量为45×103,ELISA及HI效价分别为1:640(1.56μg·mL-1)和1:160(6.25μg·mL-1),中和效价为1:160(6.25μg·mL-1);鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的相对分子质量为80×103,ELISA及HI效价分别为1:2560(0.39μg·mL-1)和1:640(1.56μg·mL-1),中和效价为1:40(25μg·mL-1).[结论]成功制备了H3N2亚型CIV鼠/犬嵌合抗体,为犬流感的临床治疗提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘永杰	南京农业大学动物医学院	50	409	12.0	18.0
2	邱冬		5	5	2.0	2.0
3	赵丹	南京农业大学动物医学院	3	1	1.0	1.0
4	韩德敏	南京农业大学动物医学院	2	1	1.0	1.0