抗牛结核分枝杆菌VHH抗体T7噬菌体库的构建与筛选

• 作者: 吴桐忠 张小莺 张星星 张齐 杨艳丽 许龙 钟发刚 韩猛立 黄新
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛结核分枝杆菌 Ag85B蛋白 VHH抗体 T7噬菌体展示
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1987-1993
• 页数: 7页
• 分类号: S852.61|R535
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.10.17

摘要

为获得抗牛结核分枝杆菌的VHH纳米抗体,本研究利用牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白免疫双峰驼,免疫效价达到1∶8 000后采外周血分离淋巴细胞,提取RNA反转录成cDNA,利用巢式PCR方法扩增出编码单域抗体VHH的400 bp基因片段.将目的片段用限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切,与T7噬菌体载体臂T7Select 10-3RI Arms连接,再通过体外重新包装含目的片段的噬菌体.对建立的VHH噬菌体抗体库进行鉴定,原始文库库容为5.7×108 PFU,库阳性率为85.7％.通过4轮生物亲和淘选,筛选并表达出2株高特异性的VHH抗体,均对牛结核分枝杆菌Ag85B蛋白具有特异性.本研究为进一步探讨VHH抗体在牛结核病的诊断和治疗奠定了基础.