绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 张靖鹏 李莎莎 林裕胜 江锦秀 游伟 胡奇林
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊肺炎支原体 丝状支原体山羊亚种 TaqMan探针荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改造
• 页码范围: 943-950
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 字数: 5023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.05.018

摘要

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)和丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri,Mmc)是引起羊支原体性肺炎(M.pneumonia of sheep and goats,MPSG)的主要病原.为了快速鉴别引起MPSG的主要病原,建立一种可以同时检测Mo和Mmc的双重TaqMan探针荧光定量PCR (Real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测方法.根据Mo p113序列和Mmc MLC1770(hypothetical protein gene)序列,利用Beacon Designer 7.9结合NCBI Blast软件分析,分别设计出针对Mo和Mmc的特异性引物和探针.通过对引物浓度、探针浓度和退火温度等反应条件的优化,建立了双重TaqMan探针qRT-PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证.结果 表明,建立的双重TaqMan探针qRT-PCR的标准曲线相关系数R2分别为0.998和0.999,扩增效率分别为94.8％和97.0％;该方法对其他羊常见病原均无扩增信号,证明该方法具有良好的特异性;该方法对Mo和Mmc的最低检测限均为1 00 copies/μL,敏感性是常规PCR的100倍;组内和组间变异系数都低于2％,说明重复性好.应用该方法对福建省内收集的187例临床样品进行检测,结果显示,Mo的阳性率为47.6％ (89/187),Mmc的阳性率为11.8％(22/187),两种病原体混合感染阳性率为10.2％(19/187).以上数据结果表明,本研究建立的方法可用于临床上Mo和Mmc的准确、快速检测.本研究为Mo和Mmc的快速检测及流行病学提供了技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡奇林	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	57	410	11.0	17.0
2	林裕胜	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	40	164	8.0	11.0
3	江锦秀	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	30	100	5.0	8.0
4	张靖鹏	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	18	29	3.0	4.0
5	游伟	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	27	76	5.0	7.0
6	李莎莎	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	1	3	1.0	1.0