噬菌体展示禽流感病毒抗原变异性基因片段文库的构建

• 作者: 付世杰 夏志平 张淑华 易乐 曲晗 李志萍 李颂 王丽萍 王习文 王雨田 田栢会
• 来源期刊: 吉林大学学报（理学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: T7噬菌体 噬菌体展示 禽流感病毒 抗原变异性基因 文库鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 989-996
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 字数: 5450字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13413/j.cnki.jdxblxb.2018460

摘要

构建T7噬菌体展示禽流感病毒抗原变异性基因片段文库.首先,从Gene Bank中查找筛选禽流感病毒抗原变异性基因,将其截短、修饰、简并后得到禽流感病毒抗原变异性基因微阵列.其次,将合成的禽流感病毒抗原变异性基因片段文库扩增、酶切,链接到双酶切后的T7噬菌体载体基因上,构成重组噬菌体DNA.最后,重组噬菌体DNA经体外包装和扩增,得到T7噬菌体展示文库,并进行T7噬菌体展示文库滴度、重组率和免疫活性测定.实验结果表明,从Gene Bank中查找、筛选、剪切和修饰共获得96 258条序列构建T7噬菌体展示文库,原始文库滴度为3.6×107个菌落/mL,重组率大于90％.用禽流感病毒H5N1抗体进行捕获,经聚合酶链式反应(PCR)鉴定,得到理想目的条带,证明噬菌体表面展示蛋白具有抗原活性,可用于禽流感病毒感染患者的快速检测及抗原表位筛选.