L-氨基酸脱氨酶的分子改造及其用于全细胞催化法生产α-酮戊二酸条件的优化

• 作者: 刘龙 堵国成 李江华 王越
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: L-氨基酸脱氨酶 条件优化 定点饱和突变 全细胞催化
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 56-64
• 页数: 9页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190308

摘要

α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG)是谷氨酸脱氨基的酮酸产物,作为一种重要的有机酸广泛用于食品、医药、精细化工等领域.为提高L-氨基酸脱氨酶全细胞催化法合成α-KG的效率及产量,首先通过优化全细胞催化剂制备条件及全细胞转化反应条件,包括发酵过程中的温度、诱导剂浓度、诱导剂添加时刻、诱导时间等;全细胞转化过程中的温度、pH、细胞量、转化时间.各个条件优化后以200g/L谷氨酸钠为底物时,产量最终提高了54.9％,摩尔转化率为39.6％.其次,通过定点饱和突变对L-氨基酸脱氨酶进行定向进化以提高其催化能力.经过多次突变、筛选,最优突变体E.coli BL21-pET-20b(+)-pml152催化200g/L谷氨酸钠生成α-KG最高产量为100.9g/L,摩尔转化率为64.7％,较最初对照菌株提高了66.3％.结果表明,条件优化和饱和突变可有效提高重组大肠杆菌全细胞转化合成α-KG的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	堵国成	江南大学生物工程学院	339	3648	30.0	42.0
2	李江华	江南大学生物工程学院	78	362	10.0	15.0
3	刘龙	江南大学生物工程学院	48	153	6.0	10.0
4	王越	江南大学生物工程学院	4	1	1.0	1.0