干扰PKM2对人白血病细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

• 作者: 唐雨婷 张伶 敬一佩 杨丽媛 汪路 蒋雪坷 陶瑶 雷力
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: PKM2 白血病 增殖 凋亡 自噬
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 13-20
• 页数: 8页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190303

摘要

目的:探讨糖酵解酶丙酮酸激酶M2型(PKM2)对人白血病细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制.方法:将靶向PKM2的慢病毒载体转染人K562细胞株(shPKM2组),同时设立空载体转染组为对照(Vector组).采用qRT-PCR和Western blot技术分别检测Vector组和shPKM2组PKM2 mRNA和蛋白的表达以及自噬标志物的变化;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平.结果:在稳定干扰PKM2后,PKM2的mRNA(=11.58,P=0.000 3)和蛋白水平(t=11.88,P=0.000 3)均明显降低.与Vector组比较,shPKM2组细胞体外增殖能力显著降低(F=118.87,P＜0.000 1).同时,干扰PKM2可使K562细胞周期阻滞在G1期,细胞凋亡率显著增加(t=37.23,P ＜0.000 1);使促凋亡蛋白Bax表达增加(t=15.36,P=0.000 1)、抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(t=9.965,P=0.000 6).此外,干扰PKM2可减弱K562细胞自噬水平,表现为LC3Ⅱ降低(tLC3Ⅱ=10.32,PLC3Ⅱ=0.000 5),而p62水平增加(tp62=14.59,Pp62=0.000 1).还发现自噬诱导剂能逆转shPKM2引起的白血病细胞体外增殖能力减弱(F =96.32,P＜0.000 1).结论:以上结果表明干扰PKM2可抑制人白血病K562细胞的体外增殖并促进其凋亡,其机制可能与PKM2介导的自噬活性降低有关,提示PKM2可能作为白血病诊疗的一个潜在靶点.