hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定

• 作者: 冯巍 詹飞 陈炯
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: hLCN6 免疫磁珠 混合斑 精子 PCR-STR
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 150-158
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.180075

摘要

hLCN6 (Human lipocalin 6)是附睾特异性分泌蛋白,它能与精子结合,对精子的成熟发挥着重要作用.为了探究应用抗hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠技术分离混合细胞中精子的可行性,建立混合斑中精子细胞分离的新方法,制备了不同比例的精子-上皮细胞混合悬液及混合斑样本,以生物素标记的hLCN6单克隆抗体孵育样品,再用亲和素包被的免疫磁珠捕获分离精子细胞,提取精子DNA进行PCR-STR (Short tandem repeat)分型,同时以差异裂解法提取精子,比较两者的差异.经ELISA检测,hLCN6单克隆抗体与抗原的亲和力解离常数(Kd)为3.47×10-9 mol/L.免疫印迹和免疫荧光结果显示,hLCN6在精子中可检测到,主要定位于精子头部的顶体后区域,但不能在上皮细胞中检测到.hLCN6抗体偶联的免疫磁珠复合物能够实现精子细胞的捕获和分离,显微镜观察显示免疫磁珠能够与精子头部特异性结合.对精子个数为103/mL的混合悬液,STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU＞200)为90％.当精子数量≥104/mL时,分型成功率达100％;对精子数分别为103/mL、104/mL、105/mL的混合斑STR分型成功率分别为40％、90％和100％.综上,hLCN6抗体偶联免疫磁珠法可以有效分离混合细胞中的精子,分型成功率高于传统的差异裂解法.该方法简单高效,可作为性侵案件中法医混合斑检验的有效补充手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈炯	河南科技大学法医学院	6	3	1.0	1.0
2	詹飞	河南科技大学法医学院	5	4	1.0	1.0
3	冯巍	河南科技大学法医学院	6	2	1.0	1.0