皮层肌动结合蛋白不同位点磷酸化对人气道上皮细胞黏蛋白5AC分泌的影响

• 作者: 周向东 尤列·皮尔曼 曾曼 李琪 维克多·科罗索夫 钟有清
• 来源期刊: 中南大学学报（医学版）
• 关键词: 黏蛋白类 分泌 剪应力 皮层肌动结合蛋白 丝状肌动蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 字数: 5972字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2019.01.001

摘要

目的:了解皮层肌动结合蛋白(cortical actin-binding protein,又称cortactin)在人气道上皮细胞黏蛋白(mucin,MUC)5AC分泌中的作用及不同磷酸化位点对其的影响.方法:培养人气道上皮细胞HBE16,以皮层肌动结合蛋白不同磷酸化位点突变载体转染细胞,并分为空白对照组、剪应力刺激组、剪应力+增强绿色荧光蛋白质粒(enhanced green fluorescent protein plasmid,pEGFP)-N1组、剪应力+pEGFP-N1-cortactin (Cort)组、剪应力+pEGFP-N 1-Cort-Y421A组、剪应力+pEGFP-N 1-Cort-Y470A组及剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y486A组,剪应力设定为4 dynes/cm2.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、real-time PCR法测定转染前后各组细胞及培养上清中MUC5AC蛋白和mRN水平,Western印迹检测各组皮层肌动结合蛋白及磷酸化皮层肌动结合蛋白含量;异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的鬼笔环肽染色观察丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)的分布情况.结果:4 dynes/cm2剪应力刺激30 min后,细胞中磷酸化皮层肌动结合蛋白表达增加,在2h时表达水平最高;剪应力刺激2h后,MUC5AC mRN表达增强,细胞及培养上清中MUC5AC的含量与空白对照组相比,各组均显著增加(均P＜0.05);与剪应力刺激组相比,剪应力+pEGFP-N 1-cortactin(Cort)组的细胞培养上清液中MUC5AC蛋白含量显著增加,F-actin在胞膜的分布也明显增多(均P＜0.05),而胞质内MUC5AC蛋白及MUC5AC mRN水平变化不大.与剪应力+pEGFP-N1-Cort组相比,剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y421A组、剪应力+pEGFP-N 1-Cort-Y470A组培养上清液中的MUC5AC蛋白含量有明显降低,F-actin在胞膜的聚集也有所减少(均P＜0.05),而剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y486A中MUC5AC含量变化不明显(P＞0.05).结论:皮层肌动结合蛋白参与了剪应力诱导产生的人气道上皮细胞MUC5AC蛋白分泌,Tyr421和Tyr470位点磷酸化在其中可能起重要的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李琪	海南医学院第一附属医院呼吸内科	11	9	2.0	2.0
2	周向东	海南医学院第一附属医院呼吸内科	30	114	7.0	9.0
3	钟有清	海南医学院第一附属医院呼吸内科	7	21	2.0	4.0
4	曾曼	海南医学院第一附属医院呼吸内科	2	0	0.0	0.0