NK细胞表面受体KIR2 DS1 mRNA表达水平检测方法的建立

• 作者: 何军 史进方 张环环 李颖 王甜 胡星 陈璐瑶 鲍晓晶
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 激活 基因 定量 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 825-830
• 页数: 6页
• 分类号: R446
• 字数: 5824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2019.11.06

摘要

目的 建立检测NK细胞表面免疫球蛋白样受体基因KIR2DS1 mRNA表达水平的荧光定量PCR方法并评价其性能.方法 以行异基因造血干细胞移植的供患者共57对为研究对象,针对KIR2DS1基因设计特异性引物及探针,构建TaqMan-MGB荧光定量PCR反应体系,并评价该实验方法的性能,包括:总符合率、重复性、灵敏度及仪器适用范围、技术人员再现性.结果 以KIR-SSO基因定性分型法为金标准,通过检测其中35例样品,荧光定量PCR方法对KIR2DS1基因阳性及阴性检测率均为100％.在重复性试验中,选取Ct值分别为高、中、低值3个样品的批内、批间CV分别为0.09％～0.46％、0.71％～1.13％.该方法的灵敏度达102 copies/μL,且对拷贝数为102 copies/μL的3个样品进行5次重复试验的CV分别为5.37％、2.71％、5.51％.仪器比对结果显示,参比仪器ABI-7500与实验仪器LC-480之间的拟合直线回归方程为Y=0.9736X+0.1183(R2=0.9619,R2>0.95).2名技术人员对10个KIR2DS1基因阳性样品的再现性比对试验结果显示其偏倚(％)均<±5％.结论 建立了TaqMan-MGB荧光定量PCR检测KIR2DS1 mRNA表达水平的检测方法,其性能良好.