摘要:
目的 研究盐霉素对人肝腹水腺癌细胞(SK-HEP1)增殖的影响及可能的作用机制.方法 以二甲基亚砜处理的SK-HEP1细胞为对照组,5,10,15μmol·L-1盐霉素处理的SK-HEP1细胞为低、中、高剂量实验组.以显微镜观察各组SK-HEP1细胞形态的变化;以细胞计数法(CCK-8)检测各实验组细胞的增殖抑制情况;以流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;以相对实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组细胞凋亡相关基因和蛋白的表达量.结果 低、中、高剂量实验组24 h的增殖抑制率分别为(32.73±8.47)%,(38.25±1.46)%和(41.68±0.05)%,48 h的抑制率分别为(42.52±2.50)%,(46.16±2.08)%和(53.99±1.27)%,实验组SK-HEP1细胞增殖抑制率随着盐霉素浓度增加和作用时间的延长逐渐升高.对照组和低、中、高剂量实验组细胞早期凋亡率分别为(14.72±1.12)%,(23.37±2.70)%,(32.68±3.99)%和(40.41±4.66)%,晚期凋亡率分别为(6.56±3.26)%,(5.54±3.32)%,(7.35±3.75)%和(10.88±5.76)%,实验组SK-HEP1早期凋亡率随着盐霉素浓度的提高而增加(P<0.05),晚期凋亡细胞所占比例无显著变化.低、中、高剂量实验组caspase-3的相对表达量为12.22±0.81,48.09±9.32,40.58±4.58,caspase-9的相对表达为1.40±0.09,1.62±0.33,1.88±0.43,与对照组(1.00±0.00)相比,差异均有统计学意义(均P<0.05),caspase-7、P53基因表达与对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05).中、高剂量实验组caspase-8的相对表达量为2.21±0.77,6.13±1.35,Bax的相对表达量为2.92±0.60,1.69±0.23,Bcl-2的相对表达量为0.51±0.05,0.18±0.14,与对照组(1.00±0.00)相比,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 盐霉素通过P53非依赖途径诱导SK-HEP1细胞发生早期凋亡,其对SK-HEP1细胞的凋亡诱导作用与caspase-3基因表达的增加相关.