基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备

• 作者: 贾宾 邵科宇 郭玉堃 郭豫杰 陈慧心 韩莹倩
• 来源期刊: 江西农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: Spyligase技术 流感血凝素H5HA10 原核表达 融合标签 多聚体
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 1-9
• 页数: 9页
• 分类号: S852.65
• 字数: 6889字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19386/j.cnki.jxnyxb.2019.03.01

摘要

利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体.将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC.通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中,Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体.