单链抗体对Cry1A类毒素的检测方法建立及识别差异初步研究

• 作者: 刘贝贝 刘贤金 张存政 张霄 曲婷婷 李盼 王耘 董飒
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: Cry1Ab Cry1Ac scFv DAS-ELISA 分子对接
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 516-525
• 页数: 10页
• 分类号: S3
• 字数: 4907字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.03.016

摘要

为建立一种针对Cry1类毒素的经济高效的检测方法,本研究以杂交瘤细胞株2D10 cDNA为模板,通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)基因,转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)表达并建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法,通过分子对接模拟分析影响scFv与Cry1A类毒素结合的关键因素.结果成功构建了scFv基因,表达纯化出具有较高识别活性的scFv抗体(约28 kD),所建立的DAS-ELISA方法对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的最低检测限(limits of determination,LOD)为20 ng/mL,分子对接结果显示,毒素的三维结构决定了其结合活性,氢键和疏水作用力在scFv与毒素结合过程中起重要作用.本研究利用基因工程抗体技术构建并表达获得了scFv抗体,建立了针对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的双抗夹心ELISA检测方法,初步分析研究了scFv与Cry1Ac/Cry1Ab和Cry1Aa的识别差异机制,为进一步改造、研究开发新型广谱scFv提供了理论依据.