甲磺酸阿帕替尼调控Ras／Raf／MEK／ERK和JAK2／STAT3信号通路影响食管癌细胞增殖迁移凋亡和荷瘤鼠移植瘤生长的机制

• 作者: 于静萍 华秋 周梦耘 孔泽 孙志强 孙菲 封悦 汪建林 王坚 胡莉钧
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 关键词: [主题词] 食管肿瘤 阿帕替尼 凋亡 裸鼠 血管内皮生长因子
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 263-275
• 页数: 13页
• 字数: 10311字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760／cma.j.issn.0253?3766.2019.04.005

摘要

目的 探讨阿帕替尼对食管癌细胞生物学功能、食管癌裸鼠移植瘤生长情况的影响及其机制.方法 采用2.5、5、10、20、40 μmol／L阿帕替尼处理食管癌细胞KYSE?150和ECA?109,采用四甲基偶氮唑蓝法检测食管癌细胞的增殖活性,采用Transwell小室法检测食管癌细胞的迁移能力,采用克隆形成法检测食管癌细胞的克隆形成率,采用流式细胞术检测阿帕替尼对细胞周期和细胞凋亡的影响,采用实时荧光定量PCR法检测食管癌细胞中血管内皮细胞生长因子( VEGF) mRNA和VEGF受体2(VEGFR?2) mRNA的表达,采用酶联免疫吸附法检测食管癌细胞上清液中VEGF浓度,采用Western blot法检测正常培养条件下和 VEGF 刺激下食管癌细胞中 MEK、ERK、磷酸化 MEK (p?MEK)、磷酸化ERK (p?ERK)、JAK2、STAT3和磷酸化STAT3( p?STAT3)的表达.建立人食管鳞癌裸鼠移植瘤模型,采用随机数字表法随机分为健康对照组、250 mg阿帕替尼组和500 mg阿帕替尼组,计算肿瘤抑制率,采用免疫组化法检测移植瘤瘤组织中VEGF和VEGFR?2的表达.结果 20、40 μmol／L阿帕替尼处理细胞24 h后,KYSE?150细胞的迁移数分别为( 428.67± 4.16)个和( 286.67± 1.53)个, ECA?109细胞的迁移数分别为(1 123.67±70.00)个和(477.33±26.84)个,均低于空白对照组[分别为(874.67±22.75)个和(1 749.67±65.77)个],差异均有统计学意义(均P＜0.05). 10、20、40 μmol／L阿帕替尼处理细胞7 d后,KYSE?150细胞的克隆形成率分别为( 65.12± 25.48)%、(58.19± 24.73)%和(29.10±22.40)%,ECA?109细胞的克隆形成率分别为( 70.61± 15.14)%、( 61.12± 17.21)%和( 43.09± 11.13)%,均低于空白对照组( 100%),差异均有统计学意义(均 P＜0.05). KYSE?150 细胞中,20 μmol／L阿帕替尼组的G2／M期细胞比例和凋亡率分别为(26.27±3.30)%和( 15.65±1.54)%,空白对照组分别为(12.14±2.13)%和(3.49±0.74)%,差异均有统计学意义(均P＜0.05). ECA?109细胞中, 20 μmol／L阿帕替尼组细胞的G2／M期细胞比例和凋亡率分别为(22.64±2.36)%和(49.26±1.62)%,空白对照组分别为(3.44±0.57)%和(6.31±1.43)%,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 20、40 μmol／L阿帕替尼抑制后,KYSE?150细胞中VEGF mRNA的相对表达水平分别为42.57± 10.43和25.69± 1.24;VEGFR?2 mRNA的相对表达水平分别为36.09 ± 10.82和13.99 ± 6.54,均低于空白对照组( 100.00 ± 0.00),差异均有统计学意义(均P＜0.05). 20、40 μmol／L阿帕替尼抑制后,ECA?109细胞中 VEGF mRNA的相对表达水平分别为75.68± 9.37和20.11±3.45;VEGFR?2 mRNA的相对表达水平分别为17.24±9.52和7.77±3.89,均低于空白对照组(100.00±0.00),差异均有统计学意义(均P＜0.05). 20、40 μmol／L阿帕替尼处理后,KYSE?150细胞中VEGF的浓度分别为(766.48±114.27) pg／ml和(497.40± 102.18)pg／ml,均低于空白对照组[(967.41±57.75)pg／ml],差异均有统计学意义(均P＜0.05);20、40 μmol／L阿帕替尼处理后,ECA?109 细胞中 VEGF 的浓度分别为( 675.21 ± 46.69) pg／ml 和( 598.95 ± 47.60)pg／ml,均低于空白对照组[(980.68± 92.74) pg／ml],差异均有统计学意义(均P＜0.05). 40 μmol／L阿帕替尼作用72 h后,KYSE?150细胞中p?MEK和p?ERK的相对表达水平分别为0.49±0.05和0.28± 0.03,均低于空白对照组(分别为1.23±0.19和0.66±0.07),差异均有统计学意义(均 P＜0.05);40 μmol／L阿帕替尼处理后,ECA?109细胞中p?MEK和p?ERK的相对表达水平分别为0.63± 0.03和1.22±0.15,均低于空白对照组(分别为1.03±0.20和1.76±0.20),差异均有统计学意义(均P＜0.05). 20 μmol／L阿帕替尼处理后,KYSE?150细胞中STAT3和p?STAT3蛋白的相对表达水平分别 为0.62±0.09和0.36±0.13,空白对照组分别为0.96±0.15和0.85±0.16,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 250 mg阿帕替尼组和500 mg阿帕替尼组食管癌荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为29.25%和19.96%,健康对照组、250 mg阿帕替尼组和500 mg阿帕替尼组裸鼠移植瘤组织中VEGF的浓度分别为(25.11± 4.12)pg／ml、(16.40±2.81)pg／ml和(15.04±4.88) pg／ml,差异无统计学意义( P＞0.05).结论 阿帕替尼可诱导食管癌细胞KYSE?150和ECA?109的凋亡而抑制其增殖、迁移和克隆形成,并抑制食管癌裸鼠移植瘤生长,其机制可能与VEGF相关通路Ras／Raf／MEK／ERK和JAK2／STAT3密切相关.