抗CEA和CA19-9的单链抗体在HEK293细胞中的融合表达及亲和力鉴定

• 作者: 宫雪超 张华 王月 胡文蔚 金建华 陆文斌
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 癌胚抗原 CA19-9 单链抗体 亲和力
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2019.18.0824

摘要

目的 在HEK293细胞中高效表达抗CEA scFv和抗CA19-9 scFv两种单链抗体的Fc融合蛋白(anti-CEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc),并测定两种单链抗体亲和力.方法 从GenBank中获取两种scFv基因序列;经优化后合成,并与pET32a(+)构成原核表达载体anti-CEA scFv/pET32a(+)和anti-CA1 9-9 scFv/pET32a(+),在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;两种scFv经PCR扩增技术删除末端终止序列,利用重叠区基因扩增法在anti-CEA scFv上游加入人IL-2信号肽,分别与含人IgG Fc段基因的pTT5载体(Fc/pTT5)构成真核表达载体(anti-CEA scFv(-t)-Fc/pTT5、IL2-anti-CEA scFv(-t)-Fc/pTT5和anti-CA19-9 scFv(-t)-Fc/pTT5);使用脂质体转染法,将3个重组质粒转入HEK293细胞中进行表达;产物经rProtein-A FF亲和层析纯化,竞争性细胞ELISA和Western blot检测.结果 免疫印迹显示,3个scFv-Fc融合蛋白均在HEK293细胞中表达;竞争结合实验表明,anti-CEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc的抗体浓度分别为8.2 nmol/L和6.0 nmol/L.结论 anti-CEA scFv和anti-CAl9-9 scFv能在HEK293细胞内表达;虽然表达量较低,但纯化后表达产物能够识别肿瘤细胞表面抗原CEA和CA19-9.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张华	江苏大学附属武进医院肿瘤内科	197	1486	19.0	30.0
2	金建华	江苏大学附属武进医院肿瘤内科	35	201	9.0	11.0
3	陆文斌	江苏大学附属武进医院肿瘤内科	27	158	8.0	11.0
4	王月	江苏大学附属武进医院肿瘤内科	11	45	4.0	6.0
5	宫雪超	江苏大学附属武进医院肿瘤内科	1	0	0.0	0.0