利用杆状病毒表达系统表达PRV/gE蛋白及间接免疫荧光抗体(IDF)检测方法的建立

• 作者: 华琳 吴斌 彭忠 朱和超 梁婉 汤细彪 范桂芳 陈焕春
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒(PRV) gE基因 杆状病毒Bac to Bac表达系统 间接免疫荧光抗体法(IDF)
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1428-1434
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.08.02

摘要

为了建立高效灵敏的伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白的间接免疫荧光抗体诊断方法,本研究将PRV/HN/SMX/2012毒株gE蛋白的自身信号肽及胞外域片段克隆到pFastBacHT B载体上,构建重组质粒pFastBacHTB-gE,并转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过3次蓝白斑筛选获得含有gE基因的重组杆粒rBacmid-gE.随后,将该杆粒转染至sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rAcMNPV-gE.经Western blot和间接免疫荧光实验(IFA)进行鉴定分析,发现重组gE蛋白在sf9细胞中表达.利用该sf9细胞建立检测血清中gE抗体的间接免疫荧光抗体(IDF)方法,通过反应条件的优化发现,将血清和羊抗猪FITC-IgG分别进行1∶40和1∶2 000稀释时所建立的方法能针对血清中gE抗体产生较强的特异性荧光;通过与商业化的ELISA检测gI/gE试剂盒(IDEXX)比较,所建立的检测方法与商业化试剂盒的总符合率为93.18％(164/176),阳性结果符合率93.75％ (120/128),阴性结果符合率91.67％(44/48),2种方法存在很强的一致性(Kappa=0.832,CI=95％);-20℃条件下保存2个月的稳定性和重复性良好.