变形链球菌gtfS、gbpB基因的串联表达及其卵黄抗体的制备

• 作者: 孙礼进 张忠宝 张智 曾波 李再新 陈咏梅
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 变形链球菌 串联表达 卵黄抗体 免疫活性
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 711-716
• 页数: 6页
• 分类号: R780.2
• 字数: 5102字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.06.014

摘要

目的:串联表达变形链球菌毒力基因gtfS、gbpB的重组融合蛋白,将其作为免疫抗原制备特异性卵黄抗体,并研究该卵黄抗体的免疫活性.方法:以变形链球菌标准菌株UA159的基因组为模板,通过PCR方法扩增gtfS的CAT区和gbpB的SYI区,以SOE-PCR方法将其串联成基因片段CAT-SYI.在限制性内切酶EcoRⅠ-HF和XhoⅠ及T4 DNA连接酶的作用下构建重组质粒pET32a-CAT-SYI,转化表达菌株E.coli BL21,用1 mmol/L IPTG诱导表达后超声破碎重组菌,将提取纯化的重组融合蛋白免疫产蛋鸡并从鸡蛋中提取卵黄抗体,利用ELISA、Western blot和斑点杂交分析该抗体的特异性和免疫活性.结果:经PCR、SOE-PCR成功扩增出约750 bp的串联基因CAT-SYI,SDS-PAGE检测结果表明其表达产物约50 kD,与目的蛋白大小符合.ELISA间接法测得卵黄抗体的效价可达1:100000以上,Western blot鉴定结果显示IgY的特异性,在相对分子量约为35 kD和70 kD处出现相应的条带,斑点杂交检测结果显示特异性卵黄抗体具有识别变形链球菌的能力.结论:制备的特异性卵黄抗体具有良好的抗变形链球菌免疫活性,为免疫防龋奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李再新		53	270	9.0	14.0
2	张智		21	46	4.0	5.0
3	曾波		5	6	2.0	2.0
4	陈咏梅		4	4	1.0	2.0
5	孙礼进		3	3	1.0	1.0
6	张忠宝		3	3	1.0	1.0