NLRP3对FFA诱导Kupffer细胞释放促炎性因子IL-1β的影响

• 作者: 何堃 罗生才 龚建平
• 来源期刊: 现代医药卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 库普弗细胞 游离脂肪酸 NLRP3炎性小体 促炎性因子
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 21-24,27
• 页数: 5页
• 分类号: R575.5
• 字数: 3838字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-5519.2019.01.006

摘要

目的 观察敲除小鼠Nod样受体蛋白3(NLRP3)基因对游离脂肪酸(FFA)激活Kupffer细胞(KCs)中NLRP3炎性小体及促炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)分泌的影响,探讨FFA导致促炎性因子IL-β分泌的机制.方法 选取野生型C57BL/6小鼠及NLRP3-/-小鼠,采用梯度离心联合选择性贴壁法分离各组小鼠KCs,将分离培养48 h的KCs以3×106的密度接种于激光共聚焦培养皿及培养瓶中,并将KCs随机分为2组(对照组和FFA组).对照组不给予任何刺激,FFA组给予棕榈酸(PA)刺激细胞,水平为0.32 mM,处理时间为8h.采用光镜及透射电镜分别观察KCs的形态变化,逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测NLRP3炎性小体、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)及天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)的mRNA表达变化,采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)技术检测NLRP3炎性小体、ASC及Caspase-1的蛋白表达水平,采用免疫荧光技术检测NLRP3及Caspase-1在KCs中的表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平.结果 光镜下见FFA组与对照组KCs形态上无显著差异,透射电镜下可见FFA刺激后KCs细胞质中吞噬了大量脂滴.野生型小鼠KCs中FFA组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);而NLRP3-/-小鼠KCs中对照组NLRP3、ASC及Caspase-1的mRNA及蛋白表达量与FFA组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).野生型小鼠FFA组KCs培养上清液中促炎性因子IL-1β与IL-18的表达水平较对照组显著增高,差异均有统计学意义(P＜0.05);而敲除小鼠NLRP3基因可显著抑制IL-1β与IL-18水平的增高,2组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 FFA可激活野生型小鼠KCs中NLRP3炎性小体,促进KCs分泌促炎性因子IL-1β;敲除小鼠NLRP3基因后可显著抑制FFA诱导KCs中NLRP3炎性小体的激活及促炎性因子IL-1β的分泌;NLRP3可作为KCs相关炎性疾病治疗的潜在靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚建平	重庆医科大学附属第二院肝胆外科	438	2018	18.0	27.0
2	何堃	重庆医科大学附属第二院肝胆外科	6	6	1.0	2.0
3	罗生才	重庆医科大学附属第二院肝胆外科	1	1	1.0	1.0