猪肺炎支原体纤毛黏附因子P97和F7-CTB对O型口蹄疫灭活疫苗的免疫增强作用

• 作者: 何孔旺 刘茂军 张雪寒 牛家强 王警 郭芸芸
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫 P97 F7-CTB 免疫增强剂
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医与水产蚕桑
• 页码范围: 204-210
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 字数: 7180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.11.046

摘要

旨在研究猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,简称Mhp)纤毛黏附因子P97以及F7鞭毛蛋白(flagellin,简称F)-霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit,简称CTB)2种重组蛋白对口蹄疫(foot-and-mouth disease,简称FMD)灭活疫苗的免疫增强作用.通过体外表达获得pCold-F7-CTB、pET32a-P97-R1 2种重组蛋白,用间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)方法检测pCold-F7-CTB蛋白的生物学活性,将重组蛋白分别与口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,简称FMDV)灭活抗原、口蹄疫灭活疫苗混合制备,皮下或腹腔接种Balb/c小鼠,共免疫2次,间隔3周.分别于免疫前、免疫后21、35、49 d采血,49 d后无菌摘取脾脏.采用阻断ELISA的方法检测小鼠血清口蹄疫O型病毒免疫球蛋白(IgG)抗体滴度,用流式细胞术检测脾淋巴细胞亚型比例,以评估免疫效力.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析结果表明,2种重组蛋白成功表达.用GMl(神经节苷脂)-ELISA方法验证pCold-F7-CTB的生物学活性,发现融合蛋白F7-CTB保留了与GMl的结合能力.小鼠免疫试验结果表明,经皮下注射接种后,单独口蹄疫病毒灭活抗原组没有产生明显的抗体水平,而F7-CTB免疫增强剂组比单独口蹄疫病毒灭活抗原组的IgG滴度更高.在试验中发现,当重组蛋白与口蹄疫灭活疫苗联合使用时,血清中的IgG滴度明显增高,CD3+ CD8+T淋巴细胞比值上升;P97和F7-CTB混合使用对口蹄疫灭活疫苗的免疫增强效果最佳.可以初步得出,免疫增强剂P97和F7-CTB具有协同作用,皮下注射可显著提高FMD的特异性IgG水平,CD3+ CD8+T淋巴细胞比值升高,显示其具有良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何孔旺	江苏省农业科学院兽医研究所	101	1368	22.0	33.0
2	刘茂军	江苏省农业科学院兽医研究所	29	287	11.0	16.0
3	牛家强	西藏农牧学院动物科学学院	38	64	4.0	6.0
4	张雪寒	江苏省农业科学院兽医研究所	21	120	7.0	10.0
5	王警	西藏农牧学院动物科学学院	2	0	0.0	0.0
9	郭芸芸	西藏农牧学院动物科学学院	2	0	0.0	0.0