鸡Rab5a与恒定链的结合特性及其在真核细胞的共定位研究

• 作者: 李梅珍 查丽莎 桂亚萍 秦文娟 谭红黎 陈芳芳 黄鑫
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: Rab5a Ii转运 细胞内吞体 细胞器定位
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 74-82
• 页数: 9页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4975字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.06.008

摘要

Rab5a是胞内转运蛋白,而恒定链(invariant chain,Ii)则是协助主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ分子装配成熟以及递呈抗原肽的免疫分子.长期以来,Ii的胞内途径机制并不清楚.本研究旨在探明鸡(Gallus gallus)Rab5a的结构特征及参与Ii在胞内转运中的作用.首先,用自行设计的引物克隆鸡Rab5a基因(GenBank No.XM_015281490),构建含鸡cIi、cIi突变体(IiD81-87aa和IiD91-99aa)的重组表达载体;其次,应用软件比对鸡和小鼠(Mus musculus)Rab5a蛋白质结构.最后,分别将Rab5a和cIi转染小鼠树突状细胞系DC2.4细胞,应用免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察鸡Rab5a与cIi和cIiD81-87aa和cIiD91-99aa在真核细胞内的定位与共定位.应用GST pull-down和Western blot检测鸡Rab5a和Ii蛋白分子间的相互作用.结果表明,克隆获得的鸡Rab5a基因与预期大小一致,为648 bp.分子结构分析表明,鸡与小鼠的Rab5a高度相似,同源性高达95.4％.同源建模分析结果显示,鸡与小鼠Rab5a均含有5个α螺旋和6个β折叠区,表明哺乳类和禽类Rab5a是同源的.激光共聚焦显微镜观察表明,鸡Rab5a和Ii均定位于细胞的早期内吞体,而突变体IiD81-87aa和IiD91-99aa却不能定位于早期内吞体.GST pull-down和Western blot结果显示鸡Rab5a能够结合Ii分子.综上所述,鸡Rab5a与Ii在早期内吞体的共定位和互相结合提示,Rab5a参与Ii在细胞内的转运.本结果为进一步研究其机理提供了新依据.