FK506结合蛋白25及其突变体与CLIC1蛋白在真核细胞内共定位的研究

• 作者: 何薇 刘晓颖 左恒 潘林鑫 耿慧武 范礼斌 阮操
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: FKBP25 转染 基因表达 共定位
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1391-1395
• 页数: 5页
• 分类号: Q28|R392.7
• 字数: 4106字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.001

摘要

目的 研究FK506结合蛋白25(FKBP25)野生型及其突变体在真核细胞内的表达、定位及与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的共定位情况.方法 以pcDNA3.1-FKBP25-FLAG为模板,分别构建以pCDGFP为载体的FKBP25野生型及其缺失突变体FKBP25(1～ 42 aa)、FKBP25(1～ 110aa)、FKBP25(43 ～ 224 aa)、FKBP25 (43 ～ 110 aa)、FKBP25(111～224 aa)的真核表达质粒,并分别转染至HEK 293T细胞中,Western blot法检测重组蛋白表达情况;将上述质粒分别与带FLAG标签的CLIC1质粒共转染至COS7细胞,激光共聚焦扫描显微镜下观察、分析荧光共定位情况.结果 成功构建了pCDGFP-FKBP25基因的一系列真核表达质粒;Western blot显示:pCDGFP-FKBP25及其突变体pCDGFP-FKBP25(1～42 aa)、pCDGFP-FKBP25(1～ 110 aa)、pCDGFP-FKBP25(43 ～ 110 aa)、pCDGFP-FKBP25 (43～224 aa)、pC-DGFP-FKBP25(111 ～ 224 aa)均能在HEK 293T细胞中有效表达;GFP-FKBP25野生型在COS7细胞中主要分布在细胞质中,细胞核中表达较少,而突变体在细胞质、细胞核均有表达,而且细胞核中的表达多于野生型.共定位实验结果表明:野生型FKBP25蛋白与CLIC1蛋白在细胞质内存在明显的共定位现象.其3个缺失突变体与CLIC1蛋白的共定位明显减少,而且共定位也存在区别:FKBP25-N与CLIC1共定位主要于细胞核中,部分分布于细胞质;FKBP25-PC和FK-BP25-C与CLIC1只共定位于细胞质中.结论 荧光共定位实验观察到FKBP25野生型及其3种突变体FKBP25(1～ 42aa)、FKBP25 (43 ～ 224 aa)、FKBP25(111～224 aa)与CLIC1蛋白存在不同程度的共定位现象,为进一步揭示FKBP25的生物学功能提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生命科学学院生物教研室	53	174	8.0	9.0
2	耿慧武	安徽医科大学生命科学学院生物教研室	17	37	3.0	5.0
3	刘晓颖	安徽医科大学生命科学学院生物教研室	57	121	6.0	8.0
4	潘林鑫	安徽医科大学生命科学学院生物教研室	19	40	3.0	5.0
5	何薇	安徽医科大学生命科学学院生物教研室	5	23	3.0	4.0
6	左恒	安徽医科大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0
7	阮操	安徽医科大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0