鸡BRD2基因及其剪接体的克隆测序与亚细胞定位分析

• 作者: 周磊 唐宏 段志强 王燕碧 袁超 赵采芹 韩一帆 高洪波
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 鸡 BRD2基因 剪接体 BD结构域 ET结构域 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 专题:鸡
• 页码范围: 1806-1815
• 页数: 10页
• 分类号: S831.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2020.08.003

摘要

[目的]克隆鸡含溴结构域蛋白2(BRD2)基因及其剪接体,并对其进行序列分析和亚细胞定位,为深入研究鸡BRD2基因及其剪接体在细胞转录调控中的作用机理打下基础.[方法]通过RT-PCR扩增鸡BRD2基因及其剪接体的编码区(CDS)序列,采用BioEdit、ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、CDART等在线软件进行生物信息学分析;鸡BRD2基因及其剪接体经Xho I和BamH I双酶切后,分别亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1多克隆位点上构建重组真核表达载体,通过转染HEK-293T细胞进行亚细胞定位分析.[结果]鸡BRD2基因CDS序列全长2340 bp,编码779个氨基酸残基,分子量为85.66 kD,理论等电点(pI)为8.74,其编码蛋白二级结构主要由无规则卷曲(60.59％)和α-螺旋(28.50％)组成,含有3个明显的功能结构域(2个BD结构域和1个ET结构域).与鸡BRD2基因相比,其剪接体BRD2-X1、BRD2-X2和BRD2-X3的CDS序列长分别为2301、2283和1983 bp,编码766、760和660个氨基酸残基.以鸡BRD2氨基酸序列为参照,BRD2-X1表现为第526～537位氨基酸缺失,BRD2-X2表现为第1～19位氨基酸缺失,BRD2-X3表现为第1～119位氨基酸缺失;与鸡BRD2蛋白相比,鸡BRD2基因剪接体BRD2-X1和BRD2-X2并未影响鸡BRD2蛋白的功能结构域,而剪接体BRD2-X3导致鸡BRD2蛋白第一个BD结构域部分缺失.鸡BRD2基因融合蛋白EGFP-BRD2及其剪接体融合蛋白EGFP-BRD2-X1、EGFP-BRD2-X2和EGFP-BRD2-X3均定位在细胞核,EGFP-BRD2和EGFP-BRD2-X1在细胞核中呈均匀分布,而EGFP-BRD2-X2和EGFP-BRD2-X3在细胞核中呈不均匀的点状分布.[结论]鸡BRD2蛋白及其剪接体均定位在细胞核,但BD结构域缺失可引起BRD2剪接体BRD2-X3细胞核定位模式的变化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段志强		30	42	4.0	6.0
2	周磊		7	11	2.0	3.0
3	高洪波		3	0	0.0	0.0
4	袁超		3	0	0.0	0.0
5	韩一帆		3	0	0.0	0.0
6	王燕碧		2	0	0.0	0.0
7	赵采芹		2	0	0.0	0.0
8	唐宏		2	0	0.0	0.0