基于Red同源重组技术构建N-乙酰葡萄糖胺发酵工程菌

• 作者: 尹鸿萍 成珺玮 杨哲 王苏妍
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 工学
• 关键词: N-乙酰葡萄糖胺 大肠杆菌 Red同源重组 发酵 乙酸
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 195-200
• 页数: 6页
• 分类号: Q815|TQ460.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20200302

摘要

N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)是一种治疗骨关节炎、风湿性关节炎的有效药物.传统的GlcNAc生产方式费时费力且存在潜在过敏源,亟待开发低成本、环保高效的GlcNAc生产工艺.该研究首先利用Red同源重组技术将氨基葡萄糖合成酶(Glucosamine synthase,glmS)和氨基葡萄糖乙酰转移酶(Glucosamine-6-phosphate N-acetyltransferase 1,GNA1)整合至大肠杆菌基因组,构建GlcNAc诱导表达菌株.然后,进一步敲除manXYZ基因簇和nagDCABE基因簇,阻断GlcNAc胞内分解代谢途径.最后,考察副产物合成途径对GlcNAc产量的影响共构建了3株工程菌,分别为:单独敲除ldhA基因,阻断乳酸合成途径工程菌;单独敲除pta-ackA基因,阻断乙酸合成途径工程菌以及双基因敲除阻断乙酸、乳酸合成代谢途径工程菌.菌体生长曲线和GlcNAc发酵产量测定结果表明,单独敲除乙酸合成代谢途径工程菌生长速率减慢但GlcNAc产率最高,摇瓶发酵至72hGlcNAc产量达6 g/L.该研究利用Red同源重组技术构建GlcNAc合成途径、改造GlcNAc胞内分解代谢途径及副产物合成途径,成功构建GlcNAc发酵工程菌,为GlcNAc工业化发酵生产奠定了工作基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹鸿萍		62	998	21.0	29.0
2	成珺玮		1	0	0.0	0.0
3	王苏妍		1	0	0.0	0.0
4	杨哲		1	0	0.0	0.0