猪伪狂犬病病毒变异株gE/gI/TK三基因缺失突变株的构建及纯化

• 作者: 刘芳 崔建涛 张宇 张鸿鑫 徐朋丽 田润博 赵宇 郑慧华 陈红英 韩昊莹
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: PRV 变异株 同源重组 gE/gI/TK三基因缺失
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 476-482
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.06

摘要

根据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV) UL区基因序列(KJ789182)设计2对特异性引物,扩增PRV NY株TK基因两侧序列,克隆至pUC-19载体,然后绿色荧光蛋白标记基因,构建转移质粒pUC-TKLRE.用转移质粒pUC-TKLRE和PRV双基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI-DNA共转染ST细胞,通过蚀斑纯化,获得表达荧光蛋白的PRV三基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+.经PCR鉴定及测序,证实获得的三基因缺失株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+在TK基因上缺失了311 bp.该病毒与亲本株PRV NY在ST细胞上培养时,具有相似的生长曲线,但其体外生长动力学比亲本株弱;且对非靶标动物小鼠是安全的.结果 表明,本试验采用同源重组,同时结合蚀斑克隆纯化技术,成功构建了1株以目前PRV流行变异株为亲本株的gE/gI/TK三基因缺失病毒,为防控当前PRV变异毒株的疫情、根除PR提供技术支持.