蛇床子素/壳聚糖衍生物胶束对破骨细胞分化及其特异性分子表达的影响

• 作者: 司誉豪 孙杰 徐桂华 涂鹏程 潘娅岚 王礼宁 郑苏阳 郭杨 马勇
• 来源期刊: 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蛇床子素/壳聚糖衍生物胶束 骨吸收 活化T细胞核因子1 骨质疏松症 破骨细胞
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 229-235
• 页数: 7页
• 分类号: R681
• 字数: 4766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-2591.2020.03.007

摘要

目的 观察蛇床子素(osthale,OST)/壳聚糖衍生物胶束(osthole-loaded N-octyl-O-sulfonyl chitosan micelles,NSC-OST)对破骨细胞分化及其特异性分子表达的影响,初步探讨其抗骨质疏松的分子机制.方法 通过使用大鼠骨髓单核细胞体外建立破骨细胞诱导模型;将细胞分为空白组、对照组、OST组、NSC-OST组,以巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)和核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)诱导细胞分化,药物组以相同的有效浓度干预细胞;采用CCK-8法观察NSC-OST对细胞活性的影响;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法测定阳性细胞数;制备骨磨片并将其与细胞共培养,通过甲苯胺蓝染色测定各组骨吸收陷窝面积;通过扫描电镜观察骨吸收陷窝的微观结构;使用荧光素酶报告基因法观察NSC-OST对细胞中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)转录表达的影响;应用Western blot法检测NSC-OST对细胞中NFATc1等相关破骨特异分子蛋白表达的影响.结果 CCK-8法发现OST和NSC-OST对骨髓前体细胞均没有细胞毒性;对照组、OST组、NSC-OST组TRAP染色阳性细胞数分别为148.8±12.5、107.6±9.7、75.0±7.4(个),OST和NSC-OST均可抑制破骨细胞的生成(P＜0.05),但NSC-OST的抑制效果更明显(P＜0.05);该3组诱导的破骨细胞生成的骨陷窝吸收面积分别为:1 344 942±164 150、824 080±37 484、597 716±14 659(μm2/片),两药物组的骨吸收活性均受到明显抑制(P＜0.05),且NSC-OST组的抑制效果更明显(P＜0.05);对照组、CsA组、OST组和NSC-OST组的荧光素酶报告基因表达量分别为29 174±1 540、9 073±824、21 661±1 430、13 434±879,两药物组均可明显抑制NFAT的转录表达,且NSC-OST组的抑制效果更好;与对照组相比,药物组均可抑制破骨特异分子NFATc1、Fos蛋白(cellular oncogene fos,c-Fos)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)的蛋白表达(P＜0.05),且NSC-OST组的效果更显著(P＜0.05).结论 NSC-OST可以抑制破骨细胞的分化以及NFATc1等相关破骨特异分子的表达,且其效果优于OST.