蛇床子素对NFATc1基因表达及破骨细胞分化的影响

• 作者: 孙杰 潘娅岚 王磊 王礼宁 郑苏阳 郭杨 顾鸣 马勇
• 来源期刊: 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蛇床子素 破骨细胞 NFATc1 骨质疏松
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 475-483
• 页数: 9页
• 分类号: R681
• 字数: 5589字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-2591.2018.05.007

摘要

目的 研究蛇床子素(osthole,OST)对破骨细胞形成和骨吸收的影响,并初步分析其分子机制.方法 体外构建破骨细胞诱导培养体系,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)法、骨吸收陷窝扫描电镜观察鉴定成熟破骨细胞,采用CCK-8(cell counting kit-8)法筛选无细胞毒性的药物浓度组,使用细胞骨架荧光染色法观察OST对其形态的影响.使用骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色进行面积定量分析,并统计吖啶橙荧光染色后凋亡破骨细胞的比例,采用荧光定量PCR法测定OST对NFATc1等相关破骨基因表达的影响.结果 体外成功构建破骨细胞培养体系,通过CCK-8法筛选出10-6、10-5 mol/L两组药物浓度.OST可使破骨细胞肌动蛋白环变细,伪足和褶皱区消失.OST 0、10-6、10-5 mol/L组TRAP染色阳性数目分别为104.6±4.5、80.4±3.7、58.2±3.1,融合指数分别为(44.3±3.3)％、(20.3±0.9)％、(12.6±0.6)％,各浓度组组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);该3组诱导的破骨细胞产生的骨陷窝数目为41.67± 1.16、34.01±2.65、26.33±4.16,骨陷窝面积(岬2/片)分别为1 445 942.0± 164 150.0、904 080.8±47 346.0、641 049.1±1 993.0,各浓度组组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);该三组破骨细胞凋亡率分别为:26.3％、30.1％、37.2％,OST组凋亡率较对照组明显升高,且差异有统计学意义(P＜0.05),但两浓度组之间差异无统计学意义(P＞0.05).RANKL诱导后NFATc1、CTSK、MMP-9、TRAP、INTE-BETA3、C-SRC的mRNA表达量分别为空白组的2.147±0.246、30.5±1.643、43.54±2.908、9.116±0.392、6.664±0.395、4.131±0.408倍,与空白组相比表达量均明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.01);OST干预后,各组表达量均受到明显抑制,OST组表达量与RANKL对照组相比差异也均具有统计学意义(P＜0.05).除了NFATc1外,两浓度组组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 OST可以通过调控NFATc1等破骨基因表达抑制破骨细胞的分化.