建立实时荧光LAMP法检测肺炎支原体

• 作者: 吴亮 夏雯 戴晓玥 易承学 王海波 邹治情 阴晴 陈盛霞
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎支原体 实时荧光环介导等温扩增 快速检测
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: R446.5
• 字数: 3629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2020.01.02

摘要

目的 建立实时荧光环介导等温扩增(LAMP)法检测肺炎支原体.方法 在LAMP体系中添加适量荧光染料SYTO-9,通过实时定量PCR仪监测LAMP反应结果 .以肺炎支原体P1基因重组质粒制备一系列浓度标准品,分别使用实时荧光LAMP法和SYBR GreenⅠ 染料LAMP法检测,比较2种方法 的检出限.肺炎支原体M129标准株菌液以10倍梯度稀释,分别以实时荧光LAMP法和肺炎支原体荧光PCR试剂盒检测,比较2种方法 灵敏度.以实时荧光LAMP法检测常见呼吸道感染病原体肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌基因组DNA,评估该方法 特异性.采集疑似肺炎支原体感染患儿咽拭子标本,分别以实时荧光LAMP法和荧光PCR法检测,比较2种方法 检出率差异.结果 实时荧光LAMP法可以检出P1基因最低限为103 copies/μL,当基因拷贝数大于104 copies/μL时,反应30 min样本组即可出现明显荧光信号.SYBR GreenⅠ染料LAMP法可以检出P1基因最低限为104 copies/μL,反应需1 h才可获得足够产物用于显色.实时荧光LAMP法灵敏度高于实时定量PCR法100倍,且对常见呼吸道病原体DNA无扩增.实时荧光LAMP法和荧光PCR法检测疑似肺炎支原体感染咽拭子标本的阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论 实时荧光LAMP法可以有效避免因开盖检测造成的气溶胶污染,反应时间短,灵敏度高,适于在基层医院中推广使用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈盛霞	江苏大学医学院	48	347	13.0	16.0
2	吴亮	江苏大学医学院	51	245	11.0	15.0
3	阴晴	江苏大学附属医院检验科	41	136	6.0	10.0
4	邹治情	江苏大学医学院	4	2	1.0	1.0
5	戴晓玥	江苏大学医学院	9	2	1.0	1.0
6	夏雯	江苏大学医学院	7	2	1.0	1.0
7	王海波	镇江市第一人民医院儿科	3	0	0.0	0.0
8	易承学	镇江市高等专科学校医药与化材学院	1	0	0.0	0.0