基于单链DNA浓度法的哈维氏弧菌核酸适配体亲和特异性研究

• 作者: 刘慧敏 彭英林 王玮 许净 郑江 鄢庆枇
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 核酸适配体 亲和特异性 ssDNA浓度 荧光显微镜
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 598-604
• 页数: 7页
• 分类号: S947|Q939
• 字数: 5163字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2020.19273

摘要

本研究采用核酸适配体的单链DNA浓度来表征其亲和力,通过测定核酸适配体与靶细菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)结合后ssDNA的浓度,来研究该核酸适配体的亲和特异性和亲和常数,并通过荧光显微镜法对其亲和特异性进行验证.结果显示,采用单链DNA浓度法测得该核酸适配体对靶细菌哈维氏弧菌的亲和力是非目标菌的15.2倍以上;荧光显微镜直接观察发现只有靶细菌能较好结合有荧光标记的核酸适配体,并呈现明显荧光;荧光阻断法发现靶细菌和非靶细菌都未呈现明显荧光,证明了该适配体有较好的亲和特异性,也进一步验证了单链DNA法的测定结果.在亲和常数的测定方面,利用单链DNA浓度法测得该核酸适配体的亲和常数Kd=(33.70±7.83)nmol/L,相应的拟合系数为R2=0.960,有较好的准确性和可靠性,说明采用单链DNA浓度法来测定适配体的亲和力和亲和常数是可行的.