兔出血症病毒特异性核酸适配体的筛选

• 作者: 刘家森 姜骞 曲连东 焦美会 胡小亮 蒋艳妹 陆涛峰
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒 适配体 SELEX技术
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 9-13
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 2855字
• 语种: 中文

摘要

为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库.以固定在PVDF膜上的VP60为靶分子,使用消减SELEX技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)进行20轮的筛选,以生物素标记的次级文库作为"一抗",以辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素作为"二抗",对文库进行Western blot鉴定,结果表明第20轮文库存在可特异性的识别VP60的核酸序列.随机选取第20轮文库的46条序列克隆、测序,得到20个高度同源序列,同时对46个适配体再次鉴定,最终得到3个特异性识别VP60的适配体.