单增李斯特菌溶血素O的PEST序列激活ERK1/2磷酸化的作用

• 作者: 俞晓蓉 宋厚辉 杭奕 祝艺然 程昌勇 陶旗 马天天
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 单核细胞增多性李斯特菌 溶血素O PEST序列 膜裂解活性 ERK1/2磷酸化
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 349-358
• 页数: 10页
• 字数: 4036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20190165

摘要

[目的]本研究旨在构建单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)溶血素O(Listeriolysin O,LLO)的关键结构域PEST序列(包含S44、S48和T51关键磷酸化位点)突变体,并针对其生物学功能展开研究.[方法]以李斯特菌参考菌株EGD-e为模板扩增编码LLO的hly基因,克隆至pET30a(+)原核表达载体,在此基础上利用氨基酸突变技术获得表达PEST突变体(LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A)的重组质粒,转入E.coli Rosetta感受态细胞中,诱导表达重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析.利用红细胞裂解试验检测重组蛋白的溶血活性,并通过Western blotting检测重组突变蛋白刺激Caco-2细胞后对MAPK关键信号分子ERK1/2磷酸化水平变化的影响.[结果]结果显示,本研究成功获得重组LLO及其突变体蛋白LLOΔPEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A.在pH5.5和7.4条件下,LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A均具有和LLO相当的溶血活性,说明PEST序列缺失或突变并不影响LLO的膜裂解活性.研究进一步发现,重组LLO及其突变蛋白刺激Caco-2细胞后均能激活ERK1/2的磷酸化.[结论]研究表明LLO的关键结构域PEST序列对于维持该蛋白的膜裂解能力及穿孔活性并非必需,且该结构域的缺失不影响李斯特菌在感染宿主时依赖LLO介导ERK1/2磷酸化的生物学过程.本研究将为进一步探索细菌感染过程中PEST序列对于LLO发挥生物学功能的潜在作用及分子机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋厚辉	浙江农林大学动物科技学院动物医学院	15	38	4.0	5.0
2	程昌勇	浙江农林大学动物科技学院	3	1	1.0	1.0
3	马天天	浙江农林大学动物科技学院动物医学院	1	0	0.0	0.0
4	杭奕	浙江农林大学动物科技学院动物医学院	1	0	0.0	0.0
5	陶旗	浙江农林大学动物科技学院动物医学院	1	0	0.0	0.0
6	俞晓蓉	浙江农林大学动物科技学院动物医学院	1	0	0.0	0.0
7	祝艺然	浙江农林大学动物科技学院动物医学院	1	0	0.0	0.0