人凝血因子IX基因在小鼠脂肪干细胞中的稳定表达

• 作者: 和红霞 孙庆云 晏亚辉 李杰 王霖虹 王馨 谢燕燕 闫振宇
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 目的基因 重组腺病毒 脂肪间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 532-538
• 页数: 7页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4359字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2020.04.014

摘要

目的 将携带人凝血因子IX(hFIX)基因(F9)的重组腺病毒转染C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC),经过传代培养后,观察F9是否在ADSC中稳定表达,探索ADSC是否可作为血友病基因治疗的载体细胞.方法 取C57BL/6小鼠腹股沟区脂肪,依据组织块悬浮法分离培养小鼠ADSC并进行传代培养,应用携带hFIX基因并含GFP荧光标记的重组腺病毒转染第3代ADSC,转染后再次进行传代培养至第4、5代细胞.荧光显微镜下观察细胞携带荧光数量,RT-PCR检测F9基因表达,ELISA法检测细胞上清液及Western Blot检测细胞内携带目的基因表达蛋白情况.结果 (1)重组腺病毒转染后荧光显微镜下可见荧光表达,细胞传代后仍具有荧光.(2)RT-PCR结果显示:四组ADSC均可表达内参GAPDH基因片段,A、B、C组可检测到目的基因F9的表达,D组未检测到F9的表达.(3)ELISA法检测凝血因子IX抗原(hFIX:Ag)结果显示:A组(81.62±8.82)ng/mL、B组(52.50±3.25)ng/mL、C组(47.41±4.00)ng/mL明显高于D组检测值(0.76±0.44)ng/mL,差异具有显著性(P<0.05).(4)Western Blot法检测四组细胞内hFIX蛋白表达情况,结果显示A组蛋白表达灰度值(0.68±0.10)、B组(0.49±0.15)、C组(0.18±0.05)明显高于D组蛋白表达灰度值(0.02±0.01),差异具有显著性(P<0.05).结论 重组腺病毒转染ADSC后,经过传代后培养,仍可表达较高的hFIX活性,可以作为血友病基因治疗的载体细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李杰	华北理工大学附属医院血液科	75	84	5.0	6.0
2	谢燕燕	华北理工大学附属医院血液科	12	10	2.0	2.0
3	闫振宇	华北理工大学附属医院	28	72	5.0	7.0
4	王馨	华北理工大学附属医院血液科	8	0	0.0	0.0
5	王霖虹	华北理工大学附属医院血液科	6	3	1.0	1.0
6	和红霞	华北理工大学附属医院血液科	2	0	0.0	0.0
7	孙庆云	华北理工大学附属医院血液科	2	0	0.0	0.0
8	晏亚辉	华北理工大学附属医院血液科	1	0	0.0	0.0