Ezh2通过维持线粒体ATP合成功能促进骨骼肌细胞分化

• 作者: 刘婉莹 徐玉乔 李凯 李青 杨帆 武晓慧 陈佳琪
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 骨骼肌细胞 分化 Ezh2 H3K27me3 线粒体
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 841-849
• 页数: 9页
• 分类号: R329.1
• 语种: 中文

摘要

[目的]探索组蛋白H3K27me3甲基转移酶Ezh2在间充质干细胞内缺失对小鼠骨骼肌细胞分化及骨骼肌线粒体的影响.[方法]构建Ezh2间充质干细胞条件性敲除小鼠(Ezh2F/FPrx1-Cre).HE染色、改良Gomori三色染色及四氮唑还原酶染色(NADH-TR)法观察细胞形态及线粒体情况.电镜观察骨骼肌细胞和线粒体超微结构.Western Blot法检测6周龄小鼠骨骼肌细胞中Ezh2、H3K27me3和骨骼肌分化相关基因Myogenin、Myosin、Desmin及线粒体蛋白CytC的蛋白表达量.Realtime RT-qPCR法检测骨骼肌分化相关基因和线粒体相关基因的表达情况.免疫组化染色检测骨骼肌中CytC的表达量,ATP含量测定试剂盒检测骨骼肌细胞内ATP含量.HE和NADH-TR染色观察2周龄小鼠骨骼肌.检测6周龄小鼠棕色脂肪中Ezh2蛋白含量,电镜观察小鼠棕色脂肪中的线粒体.[结果]敲除组骨骼肌中Ezh2及H3K27me3蛋白含量均明显降低.敲除组小鼠的骨骼肌肌纤维粗细不等,部分核内移,骨骼肌分化标志物Myogenin和MhcIIb的mRNA表达明显减少(均P<0.05),Myogenin蛋白表达量减少,NADH-TR和CytC免疫组化染色显示线粒体增加.电镜下敲除组骨骼肌肌原纤维粗细不等,细胞膜下及肌原纤维间线粒体数量明显增加,呈团块状聚集.线粒体无水肿,嵴无明显减少.敲除组线粒体相关基因CytC、Tfam、Pgc1α的mRNA和CytC蛋白表达升高(均P<0.05),但ATP含量明显降低(P<0.05).2周龄小鼠骨骼肌纤维粗细不等,但NADH含量无差别.电镜下6周龄小鼠棕色脂肪细胞线粒体无数量增加或形态异常.[结论]Ezh2在间充质干细胞阶段对小鼠骨骼肌细胞分化是必须的,并维持线粒体产生ATP的功能.Ezh2缺失小鼠骨骼肌细胞线粒体产生ATP减少,线粒体数量代偿性增加.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李青		29	355	10.0	18.0
2	杨帆		35	65	4.0	7.0
3	陈佳琪		4	4	2.0	2.0
4	刘婉莹		5	18	3.0	4.0
5	武晓慧		2	0	0.0	0.0
6	李凯		8	114	3.0	8.0
7	徐玉乔		1	0	0.0	0.0