微滴式数字PCR和实时荧光定量PCR对新型冠状病毒肺炎患者不同时间血便尿中核酸检测结果初步探讨

• 作者: 周帅锋 李世康 陈雨 张帆 潘佳 胡世雄 黄一伟 戴志辉 湛志飞 马学军
• 来源期刊: 实用预防医学
• 关键词: 新型冠状病毒 微滴式数字PCR 实时荧光定量PCR 全血 尿液 粪便
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 论著|Original Articles
• 页码范围: 1316-1320
• 页数: 5页
• 分类号: R
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-3110.2020.11.009

摘要

目的 分析微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的核酸检测结果,比较两种方法检测各类样本的差异性,为改进新型冠状病毒核酸检测方案提供数据支持. 方法 利用ddPCR和qPCR技术对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者发病不同时间的全血、尿液、粪便共22份标本进行新型冠状病毒核酸检测. 结果 两种方法对人保守区域基因扩增结果一致:全血标本信号最强,尿液次之,粪便最少;ddPCR在1份全血,1份尿液,5份粪便中检出ORF-1 ab和N基因的阳性微滴,qPCR仅在3份粪便中检出上述基因,漏检的3个标本基因拷贝数平均浓度为128 copies/ml;ddPCR在发病＜5、5～15、＞15 d的各类标本中都有检出,qPCR检出以中晚期为主;重症病例用ddPCR均可测到阳性微滴,qPCR检测的各类标本均为阴性;轻症病例的各类标本中qPCR只有粪便核酸检测阳性,ddPCR检出率高于qPCR. 结论 ddPCR可以有效克服qPCR灵敏度不足的难题,是对qPCR的有益补充,尤其是针对病毒载量比较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本,适用于早期感染的判断及患者治愈后出院诊断.