TNF-α纳米抗体的筛选、表达及特异性检测

• 作者: 刘东晨 熊盛 蔺士新 谢秋玲 雷云
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 纳米抗体 肿瘤坏死因子 噬菌体文库 筛选
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 15-21
• 页数: 7页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2002034

摘要

目的:构建肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)纳米抗体的噬菌体文库,筛选并表达与TNF-α具有亲和特异性的纳米抗体.方法:(1)利用TNF-α免疫羊驼,提取外周血淋巴细胞总RNA,构建噬菌体文库;多次淘洗筛选到与TNF-α有亲和力的克隆.(2)通过ExPASy分析其分子量和亲疏水性等理化性质,并将筛选得到的VHH基因在大肠杆菌E.coli DH5α中表达.(3)表达的NbTNF-α蛋白质经过Ni金属螯合亲和层析纯化,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测蛋白质的抗原特异性和亲和力.结果:(1)通过噬菌体文库的构建和淘洗,筛选到8个与TNF-α有亲和力的VHH基因片段.(2)通过软件预测,这8个NbTNF-α蛋白均为亲水性蛋白,其分子量为19.6 ～ 20.1kDa;在大肠杆菌中重组表达这8个抗体蛋白.(3) ELISA检测结果表明,有5株纳米抗体NbTNF-α-1、NbTNF-α-2、NbTNF-α-3、NbTNF-α-4和NbTNF-α-5能与TNF-α特异性结合.结论:成功筛选并表达了5株具有TNF-α特异性的纳米抗体,可能成为抗TNF-α的候选药物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢秋玲	暨南大学生命科学技术学院	60	665	13.0	24.0
2	刘东晨		2	2	1.0	1.0
3	蔺士新	暨南大学生命科学技术学院	1	0	0.0	0.0
4	雷云		1	0	0.0	0.0
5	熊盛		1	0	0.0	0.0