甘蓝型油菜CIPK2与CIPK16基因的克隆、表达分析与互作CBL蛋白的鉴定

• 作者: 刘舞贞 张翰风 李燕飞 李竞 杨博 江元清 燕敬利 赵培玉 辛玉琼 陈芹芹 高世东
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 油菜 类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(CIPK) 钙调磷酸酶B(CBL) 非生物胁迫 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1-12
• 页数: 12页
• 分类号: S184
• 字数: 7894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.01.001

摘要

类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(calcineurin B-like interacting protein kinase,CIPK)是植物中广泛存在的一类参与解码钙信号的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,在植物非生物与生物逆境信号转导中起着重要作用.本研究在甘蓝型油菜(Brassica napus)中通过逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)克隆获得BnaCIPK2(GenBank No.KF169730)与BnaCIPK16(GenBank No.MK571826)基因的cDNA序列.序列分析表明,BnaCIPK2和BnaCIPK16基因的开放阅读框分别为1389和1386 bp,编码氨基酸残基分别为463与461个,这2个BnaCIPK基因编码的蛋白含有保守的激酶结构域与天冬酰胺-丙氨酸-苯丙氨酸(asparagine-alanine-phenylalanine,NAF)基序.亚细胞定位结果显示,2个CIPK蛋白主要分布于细胞质与细胞核.qRT-PCR结果显示,茉莉酸(jasmonic acid,JA)、冷害以及聚乙二醇(PEG8000)显著诱导BnaCIPK2的表达,百草枯(methyl viologen,MV)处理24 h后极显著抑制BnaCIPK2的表达;水杨酸(salicylic acid,SA)、热害、冷害、双氧水(H2O2)和PEG8000可诱导BnaCIPK16的表达量上调,JA和脱落酸(abscisic acid,ABA)处理则导致BnaCIPK16的表达量下调.酵母双杂交(yeast two-hybrid,Y2H)与双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)结果表明,BnaCIPK2与油菜钙调磷酸酶B4蛋白(Brassica napus calcineurin B-like protein 4,BnaCBL4)、BnaCIPK16与BnaCBL3存在互作.本研究为阐明BnaCIPK2与BnaCIPK16的功能与调控机制提供了基础资料.