miR-375对人类诱导多能干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响

• 作者: 俞丽娜 李宁 李富荣 欧阳志斌 王晗月 蒋豆蔻 邓春艳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人类诱导多能干细胞 微小RNA-375 胰岛素分泌细胞
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 877-885
• 页数: 9页
• 分类号: R329.2+5|R363.2
• 字数: 5758字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2020.05.016

摘要

目的:探讨微小RNA-375(miR-375)在调控人类诱导多能干细胞(hiPSCs)分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)过程中的作用及可能机制.方法:构建miR-375过表达的慢病毒载体,转染hiPSCs获得miR-375稳定表达的miR-375-hiPSCs,体外诱导其定向分化为IPCs,采用real-time PCR、流式细胞术及ELISA等方法对其标志性基因、分化效率、胰岛素和C肽释放量等进行检测;生物信息学结合萤光素酶报告基因实验预测并验证miR-375的靶基因,real-time PCR及Western blot检测靶基因的表达.结果:过表达miR-375可上调胰岛β细胞标志性转录因子HNF4α、MafA、Pdx1、Pax6、Nkx6. 1、glucokinase和insulin的表达,分化效率由对照组的22. 3%提高至38. 6%;高糖刺激后胰岛素释放量由成年胰岛细胞分泌量的1/8提高到1/5;过表达miR-375可影响靶基因REST和WNT5A的蛋白翻译水平.结论:miR-375可通过干扰靶基因REST和WNT5A的翻译水平,开启胰岛素分泌相关特异性基因的表达,从而促进hiPSCs向IPCs定向分化.