猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定

• 作者: 任春晓 冯华 刘晴坤 刘运超 张改平
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 中和表位 Cap蛋白 病毒样颗粒 候选疫苗
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 137-142
• 页数: 6页
• 分类号: S858.28
• 字数: 4281字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.06.018

摘要

为了研究一种更为高效、廉价的猪圆环病毒2型(PCV2)亚单位疫苗,针对PCV2b型Cap基因核酸序列进行优化,将其编码中和表位226LKDPPLNP233的基因序列连接于Cap基因C端(Capc),并插入PE-Sumo载体,借助大肠杆菌表达系统对Capc蛋白进行表达;利用SDS-PAGE、Western blot、动态光散射和透射电镜观察等手段,对纯化后的目的蛋白活性及其形成的结构进行初步鉴定.结果显示,嵌合Capc基因片段成功插入PE-Sumo载体,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中;Sumo-Capc重组蛋白在26℃下诱导12 h能够以可溶形式大量表达;经纯化的Capc蛋白能够与PCV2单克隆抗体特异结合,并能够自组装形成直径约为18 nm的病毒样颗粒.综上,成功构建了能够表达PCV2b型中和表位嵌合Cap的大肠杆菌表达系统,纯化得到的Capc蛋白具有良好的免疫反应性,且能够自组装成病毒样颗粒.