基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立

• 作者: 张嘉琪 洪啟元 王国庆 肖云萍 解宇浩 郝峰
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 瞬时受体电位香草酸亚型4 钙激活氯离子通道 YFP-H148Q/I152L 高通量筛选细胞模型
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1032-1039
• 页数: 8页
• 分类号: R915|R311
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2020.10.02

摘要

目的 构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型.方法 采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测FRT细胞中TRPV4蛋白的表达情况.应用脂质体转染法构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型,倒置荧光显微镜下观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在细胞中的表达情况,应用荧光淬灭动力学实验测定细胞模型的有效性.加入TRPV4激活剂和抑制剂,应用荧光淬灭动力学实验检测模型能否筛选TRPV4调节剂;加入TRPV4激活剂,应用Fura-2荧光探针法检测细胞内的Ca2+浓度;通过Z'因子评估细胞模型是否适用于高通量筛选.结果 RT-PCR和Western blotting检测结果显示,FRT细胞内源性表达TRPV4.倒置荧光显微镜下清晰可见ANO1表达在FRT细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达在FRT细胞质中,即成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型.荧光淬灭动力学实验结果显示,该模型可以筛选TRPV4调节剂,斜率(Slope)值与TRPV4调节剂的浓度呈剂量依赖关系;该模型可敏感检测细胞内Ca2+的浓度变化,通过Slope值可反映细胞内Ca2+浓度的高低;Z'因子为0.728,表明该模型可高通量筛选TRPV4调节剂.结论 成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量筛选细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝峰		44	70	3.0	5.0
2	肖云萍		1	0	0.0	0.0
3	解宇浩		1	0	0.0	0.0
4	张嘉琪		1	0	0.0	0.0
5	洪啟元		1	0	0.0	0.0
6	王国庆		1	0	0.0	0.0