嗜粘蛋白阿克曼菌Amuc_1100蛋白对高脂饲料联合链脲佐菌素干预大鼠的预防保护作用

• 作者: 刘敏 刘曼妮 刘雪 张翔凌 王国庆 董新燕
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 农学
• 关键词: 嗜粘蛋白阿克曼菌 Amuc_1100蛋白 高脂饲料
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 785-789,822
• 页数: 6页
• 分类号: Q591.2|Q51|S816.4|R378.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2020.05.016

摘要

目的 构建嗜粘蛋白阿克曼菌Amuc_1100蛋白的原核表达体系,分析该蛋白对高脂饲料联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)干预大鼠体重、血糖、肠道屏障功能及嗜粘蛋白阿克曼菌丰度的影响.方法 将Amuc_1100基因(ID: 34174504)的扩增产物与双酶切后的pET-26b质粒载体连接.重组的表达质粒pET-26b-Amuc_1100转化大肠杆菌BL21感受态细胞.选取测序正确的阳性克隆菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达.纯化后的蛋白以高低两个剂量(6和3 μg/d)灌胃高脂饲料联合30 mg/kg STZ干预的大鼠8周,分析大鼠体重、血糖、肠道屏障功能相关指标(脂多糖、肿瘤坏死因子-α、二胺氧化酶、D-乳酸)及粪便中嗜粘蛋白阿克曼菌含量的变化.结果 成功构建pET-26b-Amuc_1100重组表达质粒,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中Amuc_1100基因的同源性为100％,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)结果显示获得的蛋白分子质量约为42 kDa.Amuc_1100蛋白对高脂饲料联合STZ干预大鼠的灌胃可以在一定程度上减轻大鼠体重(P＜0.05和P＜0.01),改善其肠道屏障功能(P＜0.01)及增加肠道中嗜粘蛋白阿克曼菌含量(P＜0.01).结论 成功构建Amuc_1100蛋白的原核表达系统,该蛋白对高脂饲料联合STZ干预大鼠的代谢状况有一定的调节作用.