A型流感病毒NP蛋白双单抗夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 于萌萌 张振宇 徐菱 王晓钧 郭兴
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: A型流感病毒 NP蛋白 双单抗夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 572-578
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 6509字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201910036

摘要

为建立广谱型A型流感病毒(IAV)快速检测方法,本研究选用流感病毒中高度保守的核糖核蛋白(NP)为抗原,采用真核表达系统纯化NP蛋白,并免疫小鼠,按常规方法制备IAV NP蛋白单克隆抗体(MAb).以制备的SC06 MAb作为捕获抗体,XJ04 MAb作为检测抗体,经条件优化,建立了检测IAV NP蛋白的双单抗夹心ELISA方法.结果显示,该检测方法捕获抗体浓度为2 mg/mL,0.1μg/孔,检测抗体浓度为1 mg/mL,0.05μg/孔,NP蛋白浓度在6.07 ng/mL～101.57 ng/mL时与OD450nm呈良好的线性关系,相关系数R2>0.99.该双单抗夹心ELISA方法可以特异性检测多个亚型IAV,特异性强;与血凝试验相比,该双单抗夹心ELISA方法具有很高的灵敏度,可以检测到20 ng/mL的病毒NP蛋白;批内和批间重复性变异系数均小于8％,重复性好.利用本研究建立的双单抗夹心ELISA方法与RT-PCR方法同时对28份马鼻拭子样品进行检测,结果显示二者总符合率为71.43％.本研究建立的ELISA方法可以用于甲型流感的快速诊断,也可为NP蛋白功能研究及定量检测提供技术支持.