抗人肿瘤内皮标志物1(TEM1)抗体的表达及活性鉴定

• 作者: 张玲玲 吴介恒 韩东晖 杨发 郑国旭 席文锦 郭张燕 杨安钢 秦卫军 温伟红
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤内皮标志物1(TEM1) CD248 抗体 HEK293F细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 1129-1133
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11|R730.51|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建抗人肿瘤内皮标志物1(TEM1)全抗体IgG78的真核表达载体,进行表达纯化后鉴定其生物学活性.方法 利用PCR分别从单链抗体ScFv78中扩增TEM1抗体的轻、重链可变区基因,并克隆人带有小鼠抗体恒定区的真核表达载体Bichim-L,瞬时转染HEK293F细胞,表达产物用蛋白G亲和层析柱进行纯化,所得蛋白用SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定,采用流式细胞术和活细胞ELISA检测该抗体与TEM1阳性细胞的结合特异性及亲和力.结果 成功构建了TEM1全抗体IgG78的真核表达载体,并在HEK293F细胞中表达.SDS-PAGE和Western blot法证实目的蛋白符合预期大小,流式细胞术及细胞ELISA结果显示该抗体可特异性结合TEM1阳性肿瘤细胞,且有较高的亲和力.结论 成功获得了一株具有良好结合特异性和较高亲和力的TEM1抗体.