新型肿瘤标志物人PF4重组表达、活性鉴定及单克隆抗体制备

• 作者: 丁少华 刘欢 李勇 段生宝 王红梅 田晶晶 蒙青林 陈晔洲
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血小板因子4 基因表达 活性鉴定 单克隆抗体 肿瘤标志物
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 12-16,21
• 页数: 6页
• 分类号: R392-33
• 字数: 4097字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2015.05.005

摘要

目的 构建重组表达质粒pET28a-PF4,诱导表达重组人PF4 (rhPF4),制备rhPF4的单克隆抗体.方法 将pUC-57-PF4质粒中的PF4基因克隆到原核表达质粒pET28a上,在BL21菌株中诱导表达,对表达的蛋白进行亲和层析纯化和SDS-PAGE及western blotting鉴定;MTT法检测rhPF4对对数生长期EA.hy926细胞的生长抑制作用;以rhPF4为免疫原,通过细胞融合技术制备抗rhPF4的单克隆抗体.结果 重组质粒在BL21菌株中高效表达,rhPF4占总蛋白的19％,表达蛋白分子量约14 KDa,与商品化人PF4单抗呈阳性反应;rhPF4可抑制内皮细胞EA.hy926的生长繁殖;建立的杂交瘤细胞株能稳定产生抗rhPF4单克隆抗体.结论 建立的BL21菌株可高效表达可溶性的rhPF4,该rhPF4能抑制EA.hy926的生长繁殖,制备的抗rhPF4单克隆抗体可用于新型肿瘤标志物PF4的检测试剂的开发.