高糖诱导的视网膜新生血管形成中NLRP3炎症小体与自噬的关系研究

• 作者: 周凌霄 姚国敏 李蓉 王莉 蔡天志 邓颖 闫红林
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: NLRP3炎症小体 自噬 高糖 视网膜新生血管 糖尿病视网膜病变
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 706-711
• 页数: 6页
• 分类号: R774.1
• 字数: 6553字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨在高糖诱导的视网膜新生血管形成过程中,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体与自噬之间的关系.方法 根据不同干预方式将人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,HRMEC)随机分为三组:高糖组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+高糖组、CY-09+高糖组.高糖组在M199培养基中加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理48 h;3-MA+高糖组和CY-09+高糖组分别先用5 mmol·L-1的3-MA和10 mmol·L-1的CY-09处理2 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理48 h.分别采用MTT、Transwell及Matrigel法检测细胞活力、细胞迁移和管腔形成情况,比较三组细胞活力、细胞迁移数和管腔形成数;采用Western blot法检测三组细胞NLRP3炎症小体信号通路的关键蛋白NLRP3、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)、Caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II、LC3-I、Beclin-1的表达并对比;采用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染细胞观察自噬流的情况.结果 高糖组、3-MA+高糖组、CY-09+高糖组HRMEC细胞活力分别为(153.56±1.46)％、(115.33±3.26)％ 和(116.10±1.66)％,细胞迁移数分别为(117.33±7.23)个、(70.00±2.00)个和(71.67±2.52)个,细胞管腔形成数分别为(88.33±2.08)个、(61.33±1.53)个和(62.00±3.00)个.与高糖组相比,3-MA+高糖组及CY-09+高糖组HRMEC的细胞活力、细胞迁移数和管腔形成数均明显减少(均为P<0.001),而3-MA+高糖组与CY-09+高糖组间差异均无统计学意义(均为P>0.05).与高糖组相比,3-MA+高糖组及CY-09+高糖组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、Beclin-1的蛋白相对表达量和LC3-II/LC3-I比值均明显降低(均为P<0.05),细胞内自噬流明显减弱.结论 抑制NLRP3炎症小体与自噬均可有效抑制高糖诱导的视网膜新生血管形成,且二者在其中可能发挥相互正向调控的作用.