线粒体靶向肽SS31及RIP抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对H2O2诱导的氧化应激损伤ARPE-19细胞的保护作用

• 作者: 何媛 何蓓蕾 张瑞雪 权卓娅 许雲 陈泽君
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 线粒体靶向肽SS31 氧化应激 ARPE-19细胞 程序性坏死
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 607-611
• 页数: 5页
• 分类号: R774
• 字数: 4132字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨线粒体靶向肽SS31及RIP抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对H 2 O2诱导的氧化应激损伤ARPE-19细胞的保护作用.方法 选择400μmol·L-1 H 2 O2构建氧化应激损伤模型;根据MTT结果 筛选出1μmol·L-1 SS31、40μmol·L-1 Nec-1作为实验最佳浓度.将培养的细胞分为对照组、SS31+Nec-1组、H 2 O2组、SS31+H2 O2组、SS31+Nec-1+H 2 O2组、Nec-1+H 2 O2组.利用MTT测定细胞存活率,双氯荧光素染色测定细胞活性氧自由基(ROS)水平,JC-1染色测定线粒体膜电位,Annex-inV/PI双染检测细胞PI阳性率,Western blot法检测RIP3蛋白表达水平.结果 与对照组相比,H 2 O2组细胞存活率明显降低(P<0.05).SS31+H 2 O2组、Nec-1+H2 O2组细胞存活率高于H 2 O2组,差异均有统计学意义(均为P<0.05).荧光显微镜下双氯荧光素染色结果 显示,与H 2 O2组相比,SS31+H 2 O2组、Nec-1+H 2 O2组绿色荧光明显减弱,细胞内ROS含量明显减少.流式细胞仪结果 显示:与对照组相比,H 2 O2组线粒体膜电位降低的细胞比例升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H 2 O2组相比,SS31+H 2 O2组、Nec-1+H 2 O2组线粒体膜电位降低的细胞比例降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05).AnnexinV/PI双染色结果 显示:与对照组相比,H 2 O2组PI阳性率增加;与H 2 O2组相比,SS31+H 2 O2组、Nec-1+H 2 O2组PI阳性率均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05).Western blot检测结果 显示,与对照组相比,H 2 O2组RIP3蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H 2 O2组相比,SS31+H2 O2组、Nec-1+H 2 O2组RIP3蛋白表达上调作用显著减弱,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 SS31及Nec-1对H 2 O2诱导的ARPE-19细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用.