重组人骨桥蛋白在哺乳动物细胞中的表达、纯化和活性研究

• 作者: 周美琪 杨卓一 白思益 肖欣怡 袁运生 陈会
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 重组骨桥蛋白 结直肠癌 非小细胞肺癌 HEK293E 瞬时转染
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 129-135
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0053

摘要

旨在运用哺乳动物表达载体的瞬时转染技术,转染人类胚胎肾细胞(Human Embryonic Kidney 293E,HEK293E),分泌性表达和纯化带His标签的重组人骨桥蛋白(Recombinant Human Osteopontin,rhOPN),并研究其促结肠癌以及非小细胞肺癌细胞增殖功能.合成和构建OPN融合6×His标签重组蛋白的表达载体pcDNA3.1-OPN,利用聚醚酰亚胺(Polyetherimide,PEI)瞬时转染法将pcDNA3.1-OPN转染到HEK293E细胞中,并用镍亲和层析柱对rhOPN进行纯化.SDS-PAGE电泳和Western Blot被用来检测纯化后的rhOPN蛋白在凝胶上的迁移率和纯度.此外,ELISA方法被用于测定rhOPN与抗OPN抗体间的结合能力,并用CCK-8(Cell Counting Kit-8)方法初步研究rhOPN蛋白对结肠癌及非小细胞肺癌细胞增殖的影响.结果显示,通过将pcDNA3.1-OPN瞬时转染HEK293E细胞,成功表达和纯化出纯度达95％ 的rhOPN,且rhOPN可以被抗OPN抗体很好的识别.rhOPN被证实在36μg/ml浓度时即可显著促进体外培养的HT29细胞增殖,在20μg/mL时能够促进体外培养的非小细胞肺癌H1299及HCC827细胞增殖.运用哺乳动物细胞瞬时转染技术,在HEK293E细胞中成功表达并纯化出高纯度的rhOPN蛋白,并发现rhOPN可以显著促进结肠癌及非小细胞肺癌细胞增殖,具有良好的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖欣怡	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部研究工程中心	2	0	0.0	0.0
2	杨卓一	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部研究工程中心	2	0	0.0	0.0
3	周美琪	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部研究工程中心	2	0	0.0	0.0
4	陈会	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部研究工程中心	2	0	0.0	0.0
5	白思益	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部研究工程中心	1	0	0.0	0.0