添加扩增内标的逆转录重组酶聚合酶扩增技术检测三种大豆病毒

• 作者: 冯黎霞 刘二龙 刘思思 渭婷玉 袁俊杰 陈文 魏霜 龙阳
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆花叶病毒(SMV) 菜豆荚斑驳病毒(BPMV) 南方菜豆花叶病毒(SBMV) 逆转录重组酶聚合酶常温扩增(RT-RPA) 扩增内标(IAC)
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 2261-2269
• 页数: 9页
• 分类号: S41-30
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.12.016

摘要

假阴性结果是影响核酸检测结果的主要因素之一.扩增内标(internal amplification control,IAC)在监控PCR过程中假阴性结果发挥着重要作用.为探索扩增内标在逆转录重组酶聚合酶常温扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,RT-RPA)检测过程中的应用,解决RT-RPA检测过程中的假阴性问题,本研究通过复合引物法人工构建了扩增内标,并应用于大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)及南方菜豆花叶病毒(Southern bean mo?saic virus,SBMV)三种大豆病毒RT-RPA检测过程.实验结果显示,所建立的方法能够实现目的基因特异性扩增的同时指示假阴性结果.灵敏度试验结果表明,当50μL反应体系中扩增内标添加量为1.83×104 copies时,该体系对SMV及BPMV的检测灵敏度为0.05 ng;扩增内标添加量为1.83×103 copies时,该体系对SBMV的检测灵敏度为0.05 ng.利用该方法对10批实际大豆(Glycine max)样品进行检测,与对应反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)结果一致,表明其具有良好的适用性.研究结果表明本方法可有效指示3种病毒RT-RPA检测过程中的假阴性,提高检测结果的可信度,为相关产品的监管提供技术支持和参考依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘思思		4	29	2.0	4.0
2	袁俊杰		1	0	0.0	0.0
3	龙阳		1	0	0.0	0.0
4	渭婷玉		1	0	0.0	0.0
5	刘二龙		1	0	0.0	0.0
6	冯黎霞		1	0	0.0	0.0
7	陈文		1	0	0.0	0.0
8	魏霜		1	0	0.0	0.0