过表达miR-34a脂肪干细胞外泌体调控增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的研究

• 作者: 李自力 王宝云 肖向阳 郑德义
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 脂肪干细胞 外泌体 miR-34a 人增生性瘢痕成纤维细胞 增殖凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 887-893
• 页数: 7页
• 分类号: R62
• 字数: 4870字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.06.013

摘要

目的 探讨脂肪干细胞(ADSCs)过表达miR-34a后释放的外泌体对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响.方法 从人脂肪组织中分离原代ADSCs,流式细胞术鉴定其表面标记分子,茜素红和碱性磷酸酶染色观察其成骨分化能力;采用miR-34a过表达慢病毒感染ADSCs,获得miR-34a过表达的ADSCs(ADSCs/miR-34a)和阴性对照的ADSCs(ADSCs/miR-NC),然后提取各组细胞上清液中的外泌体,获得ADSCs外泌体(ExoADSCs)、miR-34a过表达的ADSCs外泌体(ExoADSCs/miR-34a)和阴性对照的ADSCs外泌体(ExoADSCs/miR-NC),利用透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体表面标志蛋白CD81和CD63;再将得到的外泌体分别与HSF共培养,分为对照组(HSF+PBS)、ExoADSCs处理组(HSF+ExoADSCs)、ExoADSCs/miR-NC处理组(HSF+ExoADSCs/miR-NC)和ExoADSCs/miR-34a处理组(HSF+ExoADSCs/miR-34a).采用qRT-PCR法检测各组ADSCs及外泌体中miR-34a的表达水平;MTT法检测各组HSF细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组HSF细胞的凋亡水平.Western blot法检测各组HSF细胞凋亡相关蛋白(cleaved-Caspase-3、Bax和Bcl-2)、纤维化相关蛋白(COLⅠ、COLⅢ)及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白(TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3)的表达水平.结果 成功分离得到ADSCs,并具有成骨分化能力;透射电镜可见直径在50～100 nm呈双层膜结构的圆形或椭圆形囊泡状小体,Western blot显示外泌体标志性蛋白CD81和CD63阳性表达;miR-34a过表达可增加ADSCs及其外泌体中miR-34a表达水平;与ExoADSCs处理组和ExoADSCs/miR-NC处理组比较,ExoADSCs/miR-34a干预可抑制HSF增殖(P<0.05),提高其凋亡率(P<0.05),并上调cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达水平(P<0.05),并下调Bcl-2、COLⅠ、COLⅢ、p-Smad2、p-Smad3和TGF-β1等蛋白表达水平(P<0.05).结论 过表达miR-34a的ADSCs外泌体可能通过下调TGF-β/Smad信号通路抑制HSF细胞增殖,促进其凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李自力	贵州省人民医院烧伤整形科	43	59	5.0	6.0
2	肖向阳	贵州省人民医院烧伤整形科	14	20	2.0	4.0
3	王宝云	贵州省人民医院烧伤整形科	7	10	2.0	3.0
4	郑德义	贵州省人民医院烧伤整形科	15	37	4.0	5.0